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MCDB 153 培養基
，含微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 緩沖液，
不含碳酸氫鈉
粉末

產品代碼：HM-AT135


產品描述：

MCDB 培養基是為培養特定細胞類型而開發的，無需血清補充劑。每種 MCDB 培養基都針對特定的細胞類型進行配制。MCDB 105 和 110 被配制用于人類二倍體細胞的快速克隆生長正常。MCDB 131 培養基最初是為人類微血管內皮細胞 (HMVEC) 的克隆生長而開發的。MCDB 151、201 和 302 最初是為人類角質形成細胞、雞胚成纖維細胞和 CHO 細胞的克隆生長而開發的。

AT135 是含有微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 緩沖液的 MCDB 153。HEPES 是一種兩性離子緩沖液，在 37oC 時的 pKa 為 7.3，可防止在培養開始時傾向于發生的初始 pH 升高，并增加培養基的緩沖能力。建議用戶查閱文獻以獲取有關針對不同細胞系特定的培養基補充和生理生長要求的建議。

方向：

1. 將 17.7gms 懸浮在 900ml 組織培養級水中，持續溫和攪拌直至粉末*溶解。不要加熱水。

2. 在 1 升培養基中加入 1.176 克碳酸氫鈉粉末 (TC230) 或 15.7 毫升 7.5% 碳酸氫鈉溶液 (TCL013)，攪拌至溶解。

3. 使用 1N HCl 或 1N NaOH 將 pH 值調整到低于所需 pH 值的 0.2 - 0.3 pH 單位，因為在過濾過程中 pH 值會升高。

4. 用組織培養級水定容至1000ml。

5. 通過孔隙率為 0.22 微米或更小的無菌膜過濾器過濾，立即對培養基進行消毒，使用正壓而不是真空，以盡量減少二氧化碳的損失。

6. 根據需要在無菌條件下添加無菌補充劑，并將所需數量的無菌培養基分配到無菌容器中。

7. 將液體培養基儲存在 2-8°C 和避光處直至使用。

需要但未提供的材料：

• 組織培養級水（TCL010）

• 碳酸氫鈉粉（TC230）

• 碳酸氫鈉溶液，7.5% (TCL013)

• 1N 鹽酸 (TCL003)

• 1N 氫氧化鈉 (TCL002)

• 胎牛血清 (RM1112/RM10432)

質量控制：

• 外觀：灰白色至乳白色均勻粉末。

• 溶解度：14.9 gms/L 的澄清溶液。

• 不含碳酸氫鈉的 pH 值：5.10 - 5.70

• 碳酸氫鈉的 pH 值：6.40 - 7.00

• 不含碳酸氫鈉的滲透壓: 300.00 - 340.00

• 碳酸氫鈉滲透壓：320.00 - 360.00

• 培養反應：通過分析細胞的形態來定性評估培養基的生長促進能力，并通過估計細胞計數并通過至少三個傳代培養將其與對照培養基進行比較來定量評估培養基的生長促進能力。

• 內毒素含量：NMT 5EU/ml

儲存和保質期：

1. 所有粉狀培養基和制備好的液體培養基應儲存在 2-8°C。在有效期內使用。盡管有上述推薦的儲存條件，某些粉末介質在某些情況下可能會出現一些變質/降解的跡象。這可以通過顏色變化、外觀變化和顆粒物質的存在以及溶解后的混濁度來表示。

2. 不推薦制備濃縮培養基，因為游離堿氨基酸和溶解度低的鹽復合物可能在濃縮培養基中沉淀。

3. 制備培養基的 pH 值和碳酸氫鈉濃度是影響細胞生長的關鍵因素。這也受所用培養基量和培養容器體積（表面積與體積比）的影響。例如，在大瓶中，如 Roux 瓶，隨著大量二氧化碳的釋放，pH 值會明顯升高。因此，必須為每種細胞類型確定 pH、碳酸氫鈉濃度、表面積與體積比的最佳條件。我們建議嚴格監測 pH 值。如果需要，可以使用無菌 1N HCl 或 1N NaOH 或通過在二氧化碳中鼓泡來調節 pH 值。

4. 如果需要，可以在過濾滅菌之前或之后將補充劑添加到培養基中，并遵守無菌預防措施。培養基的保質期取決于添加到培養基中的補充劑的性質。

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