ELISA的基本設計如下:

1. 用分析物或捕獲一抗涂覆微孔板表面提供的固相。
2. 使用封閉溶液封閉固相上剩余的未被占據的結合位點。
3. 如果分析物包被在固相上，則添加抗分析物第一抗體用于檢測
4. 另一方面，如果固相被抗分析物一級抗體包被，則分析物被添加到孔中以被抗體捕獲，隨后是洗滌步驟。之后，添加第二種抗分析物初級抗體來檢測捕獲的分析物
5. 多余的試劑被洗掉，使結合的分析物與游離的分析物分離。
6. 加入能夠識別檢測抗分析物第一抗體的酶綴合物，隨后進行洗滌步驟
7. 加入酶的底物以產生與目標分析物水平成比例的有色產物。