2.

一抗將一抗在適當?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。
孵育
在合適的緩沖液清洗兩次，每次5分鐘

3.

將兩份PLA®探針，以1：5的比例在適當?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。
+37 °C孵育60分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次5分鐘

4.

在H2O中以1：5的比例稀釋連接儲液。

在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。

+37 °C孵育30分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次2分鐘

5.

在H2O中以1：5的比例稀釋擴增儲液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。
+37 °C孵育100分鐘用1 x洗滌液B清洗2次，每次10分鐘用0.01x洗滌液B清洗1分鐘

6.

成像準備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品，等待15分鐘，然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進行分析。

注意：

• 使用沒有蓋玻片的開放液滴反應，并在加濕室中進行所有孵育。

• 請使用冷凍塊將酶從冷凍室（-20oC）中取出。

• 應在搖床上以最小體積（70毫升），并輕微搖晃進行清洗。